生化药品制造工职业技能等级证书 练习卷

1在枯草芽孢杆菌发酵生产某胞外酶时，发酵液经离心去除菌体后，上清液需进行硫酸铵盐析，盐析操作中通常将硫酸铵缓慢加入并持续搅拌，其主要目的是

1. A. 防止局部盐浓度过高导致目标蛋白变性失活
2. B. 提高硫酸铵在溶液中的溶解度以缩短盐析时间
3. C. 使菌体碎片同步沉淀以简化后续离心步骤
4. D. 促进目标蛋白与杂蛋白形成共沉淀以提高收率

2某发酵车间在实罐灭菌后对空罐进行保压冷却，操作中冷却水进入夹套的时机应选择在

1. A. 灭菌结束立即通入冷却水快速降温
2. B. 罐内压力降至略高于大气压后再通冷却水
3. C. 罐内压力降至常压时再通冷却水
4. D. 罐内温度降至100℃以下时再通冷却水

3在冻干制剂生产中，某生化药品溶液经预冻后进行升华干燥，若制品出现融化回缩现象，首先应检查的操作参数是

1. A. 冻干箱内真空度是否低于设定值
2. B. 搁板温度是否超过制品共晶点
3. C. 冷阱温度是否高于-40℃
4. D. 后箱压力是否高于箱内压力

4某纯化车间用亲和层析纯化带His标签的蛋白，上样后先用含低浓度咪唑的缓冲液洗涤，再用高浓度咪唑洗脱，低浓度咪唑洗涤的主要作用是

1. A. 竞争性洗脱与介质非特异结合的杂蛋白
2. B. 使目标蛋白构象展开便于后续洗脱
3. C. 中和介质表面电荷以降低背景吸附
4. D. 将目标蛋白部分洗脱以提高纯度

5在青霉素发酵过程中，补加葡萄糖前需要重点确认的工艺参数是

1. A. 发酵液pH值与残糖浓度
2. B. 罐内搅拌电机电流
3. C. 空气过滤器压差
4. D. 冷却水回水温度

6在离子交换层析纯化某蛋白时，洗脱峰出现拖尾且回收率低，最应优先检查的是

1. A. 层析柱是否装填不均产生沟流
2. B. 洗脱缓冲液是否经0.22μm过滤
3. C. 检测器波长是否设置正确
4. D. 上样蛋白浓度是否超过柱容量

7某抗生素发酵单位低于历史水平，排查发现发酵罐蛇管有轻微渗漏，冷却水进入罐内，最先受影响的参数是

1. A. 发酵液体积与稀释速率
2. B. 罐压与通气比
3. C. 搅拌功率与转速
4. D. 接种龄与接种量

8某发酵罐灭菌后准备接种，操作中符合无菌接种要求的有（多选）

1. A. 接种前对接种管路通蒸汽灭菌并冷却
2. B. 在火焰保护下快速完成接种操作
3. C. 接种时开启罐顶人孔以平衡罐压
4. D. 接种后取样检测无菌合格再继续培养
5. E. 接种前将种子液在超净台内倒入接种瓶

9离子交换层析纯化某生化药品时，操作工用提高洗脱液盐浓度的方式把目标产物洗下，这一操作依据的主要原理是

1. A. 盐离子与目标产物竞争树脂上的带电基团
2. B. 高盐使目标产物溶解度下降而析出
3. C. 盐浓度升高改变了树脂的孔径大小
4. D. 高盐使目标产物电荷完全消失

10某操作工在制备注射用生化药品时，需要将配制好的药液通过除菌过滤器除菌，下列做法符合除菌过滤要求的是

1. A. 选用0.22微米滤膜并在使用前后做完整性测试
2. B. 选用0.45微米滤膜并只在使用前做完整性测试
3. C. 选用0.22微米滤膜并只在使用后做完整性测试
4. D. 选用0.45微米滤膜并在使用后做完整性测试

11某操作工在结晶工序中用降温方式使生化药品从溶液中析出，发现晶体细小且含杂质较多，若要改善晶体质量，比较合理的调整方向是

1. A. 适当减慢降温速率并控制过饱和度
2. B. 加快降温速率以缩短结晶时间
3. C. 提高搅拌转速使晶体充分破碎
4. D. 减少晶种加入量或不加晶种

12某生化制药车间采用离子交换层析纯化酶制剂，上样前发现缓冲液电导率高于工艺规程上限，正确的处置方式是

1. A. 直接上样并提高洗脱盐浓度
2. B. 用注射用水稀释缓冲液至合格范围
3. C. 将上样流速降低一半后继续
4. D. 更换更高交换容量的层析介质

13某批次发酵液在提取工段进行离心分离时，上清液仍明显浑浊，操作人员下一步最合理的处置是

1. A. 提高离心机转速后直接进入下一批
2. B. 检查离心机进料流量是否超过额定值
3. C. 向发酵液中补加消泡剂再离心
4. D. 将上清液直接转入层析柱上样

14在无菌灌装工序中，操作人员发现层流罩下风速报警，此时最符合规范的做法是

1. A. 暂停灌装并检查高效过滤器及风速设定
2. B. 继续灌装但增加人员巡检频次
3. C. 调低报警阈值后继续生产
4. D. 将灌装速度提高以减少暴露时间

15在抗生素发酵生产中，接种后菌体进入对数生长期时，为维持溶氧水平，通常采取的操作是

1. A. 提高搅拌转速并适当增大通气量
2. B. 降低罐压以减少泡沫产生
3. C. 减少补料量以降低菌体耗氧
4. D. 将罐温下调至菌体最低生长温度

16某发酵罐在灭菌后冷却阶段发现罐内出现轻微负压，正确的处置方式是

1. A. 立即打开罐顶人孔使罐内外压力平衡
2. B. 通过无菌空气管路向罐内补入无菌空气维持正压
3. C. 关闭所有阀门让罐体自然回温升压
4. D. 加大夹套冷却水流量以缩短冷却时间

17在结晶操作中，将溶液缓慢降温并维持适度搅拌，与快速降温相比，其主要优点是

1. A. 可获得粒度较大且分布较均匀的晶体
2. B. 可显著提高目标产物的最终收率
3. C. 可完全避免晶体中包裹母液杂质
4. D. 可省去后续的过滤与洗涤工序

18某批链霉素发酵液在提取工序采用离子交换法，上柱前将发酵液稀释并调节pH至中性附近，其主要工艺目的是什么

1. A. 使链霉素以阳离子形式被树脂吸附
2. B. 使链霉素以阴离子形式被树脂吸附
3. C. 使色素类杂质优先被树脂截留
4. D. 使发酵液中残留菌丝体充分沉降

19在基因工程菌发酵生产中，诱导阶段常用的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）与乳糖相比，其主要优势是什么

1. A. 不被菌体代谢且诱导强度稳定可控
2. B. 能被菌体代谢从而降低生产成本
3. C. 对菌体生长无任何抑制作用
4. D. 诱导后无需控制温度即可高效表达

20在生化药品冻干生产中，某批产品冻干后出现瓶内饼块萎缩、边缘发泡的现象，经查冻干机搁板温度记录正常，最可能出问题的环节是

1. A. 预冻阶段降温速率过快导致冰晶细小
2. B. 升华阶段搁板温度设定偏低
3. C. 解析干燥阶段真空度维持过高
4. D. 冻干后压塞时箱内压力偏高

21发酵罐实消结束后，操作工准备接无菌空气降温，此时罐内维持正压的最主要目的是什么

1. A. 防止罐内培养基因缺氧而染菌
2. B. 防止外界带菌空气倒吸入罐内
3. C. 防止罐内蒸汽冷凝水回流过多
4. D. 防止罐压过高导致安全阀起跳

22离子交换层析中，当目标蛋白等电点为5.0、缓冲液pH为7.0时，该蛋白带负电荷，宜选用哪种交换介质进行吸附

1. A. 强酸性阳离子交换剂
2. B. 强碱性阴离子交换剂
3. C. 弱酸性阳离子交换剂
4. D. 疏水性吸附树脂

23洁净区操作人员在灌装过程中发现手套表面有微小破损，正确的处置方式是

1. A. 立即用酒精棉擦拭破口后继续操作
2. B. 在破损处再戴一副手套继续操作
3. C. 立即退出洁净区更换手套并按规定重新消毒
4. D. 坚持到本班结束再统一更换手套

24某车间对一批发酵液进行提取，发现目标产物收率明显低于中试数据，排查时首先应核对哪项工艺参数记录

1. A. 发酵罐的清洗记录
2. B. 提取溶剂的批号和用量
3. C. 洁净区的温湿度记录
4. D. 操作人员的培训档案

25离心分离菌体时，若发现清液中有大量菌体流失，而设备转速和进料流量均未改变，最应先检查的是哪一项？

1. A. 转鼓内是否积存大量固相
2. B. 进料管是否出现堵塞
3. C. 冷却水温度是否偏低
4. D. 排渣周期是否被人为缩短

26超滤浓缩蛋白质溶液时，若发现膜通量快速下降且跨膜压差升高，较合理的下一步操作是？

1. A. 提高进料泵转速维持通量
2. B. 降低循环流速以减小压差
3. C. 停机进行正冲或反冲清洗膜面
4. D. 将料液温度提高10℃继续运行

27某批纯化后的生化药品溶液经除菌过滤后需灌装，若灌装过程中出现装量差异增大，首先应排查的环节是？

1. A. 除菌滤芯是否发生堵塞
2. B. 灌装泵的计量系统是否异常
3. C. 料液储罐的温度是否偏低
4. D. 洁净区压差是否出现波动

28发酵罐实罐灭菌时，夹套通蒸汽预热到90℃后再向罐内通蒸汽的目的主要是

1. A. 缩短升温时间并减少冷凝水
2. B. 提高蒸汽压力便于快速灭菌
3. C. 防止培养基中热敏成分瞬间降解
4. D. 避免罐内产生负压造成罐体变形

29离子交换层析中，目标蛋白在pH低于其等电点时带正电荷，应优先选用

1. A. 阳离子交换树脂
2. B. 阴离子交换树脂
3. C. 葡聚糖凝胶过滤介质
4. D. 疏水相互作用层析介质

30用板框过滤机过滤含菌体发酵液时，滤液初始浑浊随后逐渐澄清，最可能的原因是

1. A. 滤布上逐渐形成滤饼起到深层过滤作用
2. B. 滤布孔径被高压扩大导致穿透
3. C. 进料泵转速下降使流量减小
4. D. 滤液温度升高使黏度降低

31发酵过程中溶氧电极读数突然降至接近零，而罐压和通气量正常，最先应检查

1. A. 电极膜是否破损或电解液耗尽
2. B. 菌体是否进入衰亡期
3. C. 培养基是否被污染
4. D. 搅拌电机是否反转

32在抗生素发酵生产中，发酵液经离心分离得到菌丝体后，若目标产物为胞内酶，下一步最合理的处理方式是

1. A. 直接对离心上清液进行盐析沉淀
2. B. 将菌丝体用缓冲液重悬后进行高压均质破碎
3. C. 将菌丝体干燥后直接装柱层析
4. D. 向上清液中加入絮凝剂后再次离心

33冻干过程中制品出现底部融化而顶部仍冻结的现象，最可能的原因是

1. A. 预冻速率过快导致冰晶细小
2. B. 升华阶段搁板温度设定偏高
3. C. 一次干燥时真空度过低
4. D. 制品装量过少导致传热过快

34在蛋白质盐析沉淀操作中，下列做法有助于保持目标蛋白活性的有（多选）

1. A. 在4℃条件下缓慢加入硫酸铵粉末
2. B. 边加盐边温和搅拌避免局部浓度过高
3. C. 沉淀后立即用大量纯水快速稀释
4. D. 盐析后离心收集沉淀并用缓冲液复溶
5. E. 加入硫酸铵后长时间剧烈涡旋混匀

35某批次青霉素发酵过程中，操作工发现发酵液pH持续下降且糖耗速率明显变慢，下一步最合理的处置是

1. A. 适当补加碳源并调节pH
2. B. 立即升温至35℃促进代谢
3. C. 加大通气量并停止补料
4. D. 放罐并送下游提取

36某操作工在超滤浓缩蛋白溶液时，发现膜通量迅速下降，下列处理措施中最合适的是

1. A. 适当降低循环流速并反冲清洗膜
2. B. 提高跨膜压差继续运行
3. C. 升高料液温度至60℃
4. D. 加大进料浓度继续浓缩

37某操作工在提取纯化生化药品时，涉及有机溶媒的使用，下列做法中符合安全与工艺要求的有（多选）

1. A. 在通风良好的区域操作并接地防静电
2. B. 密闭储存溶媒并远离火源
3. C. 用敞口容器在明火旁加热溶媒
4. D. 将废溶媒直接倒入下水道
5. E. 操作时佩戴防护手套和护目镜

38某批发酵液经板框过滤后滤液澄清度差，取样发现滤布表面滤饼薄且分布不均，最可能的原因是

1. A. 进料压力上升过快导致滤饼被压实
2. B. 进料初期流量过大冲散了滤饼
3. C. 助滤剂加入量不足或预涂不均匀
4. D. 滤液温度偏低使黏度升高

39冻干制剂生产中，制品在升华干燥阶段出现崩解、喷瓶，最可能的原因是

1. A. 预冻速率过快导致冰晶细小
2. B. 升华阶段搁板温度超过共晶点
3. C. 解析干燥阶段真空度过高
4. D. 冻干箱内氮气回充过早

40在生化药品生产中，洁净区操作人员更换无菌手套后，正确的做法是

1. A. 用酒精喷淋手套表面后立即操作
2. B. 用消毒剂擦拭手套并待干后操作
3. C. 在层流下甩干手套后操作
4. D. 用无菌纱布擦干手套后操作

41在抗生素发酵生产中，发酵液经离心除去菌体后得到的滤液，下一步最常采用的提取方法是

1. A. 溶剂萃取法
2. B. 离子交换法
3. C. 盐析沉淀法
4. D. 凝胶过滤法

42某批发酵液在提取阶段乳化严重，静置后仍不分层，下列处理措施中最合理的是

1. A. 加入少量破乳剂并温和搅拌后静置
2. B. 提高温度至80℃后剧烈振荡
3. C. 加入大量有机溶剂并高速离心
4. D. 直接弃去乳化层不回收目标产物

43某批冻干粉针剂在冻干过程中出现瓶内产品部分融化回缩，最可能的原因是

1. A. 一次干燥阶段搁板温度超过产品共晶点
2. B. 二次干燥阶段真空度过高
3. C. 预冻阶段降温速率过快
4. D. 冻干箱内氮气回充过早

44在发酵过程中出现发酵液pH异常下降且伴随泡沫增多，下列处置措施中合理的有（多选）

1. A. 检查补料中碳源是否过量
2. B. 适当增加消泡剂加入量
3. C. 取样镜检确认是否染菌
4. D. 立即提高发酵温度以抑制泡沫
5. E. 关闭搅拌以降低泡沫产生

45某厂采用离子交换法提取庆大霉素，上柱后先用水洗，再用稀氨水洗脱。若上柱流速过快，最可能出现的后果是

1. A. 目标产物尚未充分吸附即随流出液流失
2. B. 树脂骨架被高速液流机械破碎
3. C. 氨水洗脱峰变窄导致产物浓度过高
4. D. 树脂交换容量因流速升高而增大

46在青霉素发酵过程中，补料分批培养的中期出现溶氧急剧下降、pH略降、菌体浓度增长放缓，此时最合理的操作调整是

1. A. 适当降低补糖速率以缓解供氧不足
2. B. 提高搅拌转速至设备上限并维持补糖不变
3. C. 立即停止补料等待溶氧恢复后再按原速补料
4. D. 加大通气量同时提高罐温促进代谢

47某冻干制剂完成冻干后压塞出箱，发现部分瓶内制品上层有蜂窝状结构，下层正常，操作记录显示升华阶段搁板升温速率较快，该现象最可能的原因是

1. A. 预冻速率过快形成细小冰晶
2. B. 升华阶段供热过快导致冰升华与逸出不平衡
3. C. 冷阱温度过高使水蒸气未被充分捕集
4. D. 冻干箱真空度过高使冰直接融化

48某批发酵液在提取前需要固液分离，离心机运行中操作工发现振动值缓慢上升但未超报警限，此时正确的处置是

1. A. 继续运行并记录振动趋势待班后处理
2. B. 降速运行至振动稳定后维持生产
3. C. 立即停车检查转鼓内物料分布是否偏载
4. D. 提高进料速度以压住振动波动

49离子交换层析上样前，缓冲液pH应控制的原则是使目标产物所带电荷与交换剂相反，同时还要满足的条件是

1. A. 使目标产物带电量尽可能大且稳定
2. B. 使杂蛋白带电量尽可能小
3. C. 使缓冲液离子强度尽可能高
4. D. 使缓冲液温度尽可能接近室温

50某发酵罐灭菌后保压冷却期间，操作工发现罐内压力下降速度比平时快，正确的处置是

1. A. 立即通入无菌空气维持正压
2. B. 补加蒸汽使压力回升至设定值
3. C. 暂停冷却待压力稳定后再继续
4. D. 检查各阀门与接口是否有泄漏点

51发酵过程中补料速率过快导致代谢副产物积累，操作工拟调整补料策略，较合理的做法是

1. A. 维持补料速率并提高搅拌转速
2. B. 将补料方式改为指数流加并按溶氧反馈调节
3. C. 暂停补料至副产物被菌体重新利用
4. D. 提高发酵温度以加快副产物代谢

52某批发酵液在放罐前镜检发现菌体形态正常但产率明显偏低，发酵周期已到，下一步最合理的处置是

1. A. 延长发酵周期继续培养观察产率是否回升
2. B. 按既定工艺放罐并记录异常进入提取工序
3. C. 补加碳源后重新灭菌继续发酵
4. D. 升温至杀菌温度直接灭活后废弃整罐

53离子交换层析纯化某碱性蛋白时，洗脱液pH应选择的原则是

1. A. 高于蛋白等电点使蛋白带负电
2. B. 低于蛋白等电点使蛋白带正电
3. C. 等于蛋白等电点使蛋白不带电
4. D. 远离蛋白等电点使蛋白变性沉淀

54某生化药品生产车间在批记录审核时发现发酵工序的实际接种量与工艺规程规定值偏差超过允许范围，正确的处理方式是

1. A. 按实际记录归档，无需偏差调查
2. B. 启动偏差调查并评估对产品质量的影响
3. C. 由操作工自行修改记录使其符合规程
4. D. 在批记录备注中说明后直接放行成品

55在重组人胰岛素大肠杆菌发酵中，采用补料分批培养时，补料速率的主要控制依据是

1. A. 发酵罐内溶解氧浓度和pH的联动趋势
2. B. 发酵液体积是否达到罐体容积上限
3. C. 发酵罐搅拌电机的额定电流值
4. D. 发酵液的颜色由浅变深的速度

56在超滤浓缩蛋白质溶液过程中，若发现膜通量持续下降且跨膜压差升高，正确的处置方式是

1. A. 暂停操作进行膜清洗或反冲洗
2. B. 继续提高进口压力以维持通量
3. C. 降低料液温度至4℃以下继续运行
4. D. 将超滤膜组件更换为孔径更大的膜

57在生物反应器操作中，采用机械搅拌式发酵罐培养丝状真菌时，搅拌桨叶尖端线速度过高最可能造成的影响是

1. A. 菌丝体被剪切破坏导致产量下降
2. B. 发酵液溶氧系数显著提高
3. C. 发酵罐传热效率大幅增强
4. D. 泡沫产生量明显减少

58在抗生素发酵过程中，发酵液pH值异常升高且糖耗速率明显下降，镜检发现菌丝断裂、原生质体溢出，此时最可能发生的染菌类型是

1. A. 噬菌体污染
2. B. 杆菌污染
3. C. 酵母菌污染
4. D. 放线菌污染

59在发酵罐实罐灭菌操作中，灭菌结束后进行降温冷却时，正确的操作顺序是

1. A. 先关排气阀再通冷却水
2. B. 先通冷却水再关排气阀
3. C. 同时关闭排气阀和通入冷却水
4. D. 先开大排气阀再通冷却水

60某批注射用生化药品在除菌过滤后放置4小时才进行灌装，过滤后放置时间过长可能导致的主要风险是

1. A. 药液pH值升高
2. B. 内毒素超标
3. C. 微生物繁殖污染
4. D. 药物含量下降

61在青霉素发酵生产中，发酵液经板框过滤除去菌丝体后，滤液下一步通常采用何种方法进行初步浓缩和纯化

1. A. 溶剂萃取法
2. B. 离子交换法
3. C. 凝胶过滤法
4. D. 冷冻干燥法

62在蛋白质类生化药品的盐析沉淀操作中，加入硫酸铵时缓慢搅拌并分次少量加入，其主要目的是

1. A. 避免局部盐浓度过高导致目标蛋白变性
2. B. 使硫酸铵溶解速度加快缩短操作时间
3. C. 防止硫酸铵结晶析出堵塞管道
4. D. 提高盐析沉淀的收率至百分之百

63在冻干粉针剂生产中，药液灌装后进入冻干机，预冻阶段需要将药液温度降至共晶点以下，其主要目的是

1. A. 使药液完全冻结形成固体骨架便于升华
2. B. 使药液中的水分快速蒸发减少能耗
3. C. 使药液中的微生物被低温杀灭
4. D. 使药液中的蛋白质发生沉淀便于成型

64发酵罐实罐灭菌时，夹套通蒸汽预热后准备通入直接蒸汽升温，此时罐内搅拌应保持什么状态

1. A. 保持低速运行以利传热均匀
2. B. 完全停止以避免轴封磨损
3. C. 切换到高速运行以缩短升温
4. D. 间歇启停以节省蒸汽消耗

65采用有机溶剂沉淀法从发酵滤液中回收蛋白质类产品，操作温度一般控制在较低范围，主要目的是

1. A. 降低蛋白质变性速率并减少溶剂挥发损失
2. B. 提高溶剂对杂蛋白的溶解能力
3. C. 增加目标蛋白在溶剂中的溶解度
4. D. 使溶剂与水形成共沸便于回收

66对某一含热敏性活性成分的发酵滤液进行浓缩，下列操作顺序中最合理的是

1. A. 先超滤去除小分子杂质，再真空薄膜浓缩
2. B. 先常压煮沸浓缩，再超滤除杂
3. C. 先冷冻干燥成粉，再加水复溶超滤
4. D. 先高速离心，再常压蒸馏浓缩

67发酵罐实罐灭菌结束后，操作工按规程先通入无菌空气保压再降温，这一操作的主要目的是什么

1. A. 防止罐内形成负压吸入外界带菌空气
2. B. 加快罐体降温缩短发酵准备时间
3. C. 提高罐内溶解氧利于接种后菌体生长
4. D. 避免培养基中还原性物质被氧化

68冻干制品在冻干过程中出现瓶内药液喷溅、瓶口挂壁，最可能的原因是

1. A. 预冻阶段降温速率过快使冰晶细小
2. B. 升华阶段搁板温度高于制品共晶点
3. C. 解析干燥阶段真空度低于设定值
4. D. 预冻保温时间短于工艺规定值

69在结晶工序中，为获得较大且均匀的晶体，操作上通常采取的方式是

1. A. 快速降温并剧烈搅拌使过饱和度骤增
2. B. 缓慢降温并控制搅拌转速使过饱和度平稳
3. C. 将溶液浓缩至过饱和后立即快速冷却
4. D. 加入大量晶种并快速搅拌维持高过饱和度

70某纯化工序在层析上样前发现平衡缓冲液的电导值比工艺规定上限高出一倍，正确的处置是

1. A. 直接上样并延长平衡时间
2. B. 稀释或更换缓冲液至规定范围后再上样
3. C. 提高上样流速以缩短高电导接触时间
4. D. 在上样后再用低电导缓冲液冲洗柱子

71在离子交换法纯化某碱性多肽时，操作工用pH 6.0的缓冲液上样，目标多肽带正电荷，应选用哪种离子交换介质

1. A. 弱酸性阳离子交换树脂
2. B. 强碱性阴离子交换树脂
3. C. 弱碱性阴离子交换树脂
4. D. 强酸性阳离子交换树脂

72在使用高速管式离心机分离菌体时，操作工启动前必须确认的关键安全事项是

1. A. 转鼓对称装液并锁紧后再升速
2. B. 先升速到额定转速再加料液
3. C. 进料管先充满料液再启动
4. D. 分离因数调到最大后启动

73某发酵批次的效价明显低于历史水平，操作工核查发现种子罐移种时菌体浓度偏低，下一步最合理的做法是

1. A. 延长种子罐培养时间待菌体浓度达标再移种
2. B. 直接加大发酵罐接种量弥补
3. C. 提高发酵罐初始温度促进生长
4. D. 向发酵罐补加氮源刺激生长

74从发酵液中提取胞内产物时，首先需要进行细胞破碎，高压匀浆法破碎大肠杆菌时最需要控制的关键参数是

1. A. 匀浆压力与通过次数
2. B. 发酵液的颜色深浅
3. C. 破碎后菌液的pH值
4. D. 破碎罐的材质厚度

75用盐析法初步分离发酵液中的目标蛋白时，通常采用硫酸铵分级沉淀，其原理是

1. A. 高盐浓度破坏蛋白水化膜并中和表面电荷
2. B. 高盐浓度使蛋白分子间形成共价交联
3. C. 高盐浓度降低了溶液介电常数使蛋白变性
4. D. 高盐浓度使蛋白的等电点向酸性方向移动

76在蛋白质纯化中，超滤技术用于浓缩和换液，若目标蛋白分子量为30 kDa，选择截留分子量为多少的超滤膜最合适

1. A. 5 kDa
2. B. 10 kDa
3. C. 30 kDa
4. D. 100 kDa

77在抗生素发酵过程中，操作工发现发酵液pH持续偏低且菌体浓度增长缓慢，镜检发现菌丝断裂增多，此时最应优先排查的参数是

1. A. 发酵罐搅拌转速与剪切力是否过高
2. B. 培养基中磷酸盐缓冲能力是否足够
3. C. 种子罐接种时的种龄是否偏年轻
4. D. 发酵尾气中二氧化碳含量是否偏低

78操作工在配制发酵培养基时，将葡萄糖与磷酸盐分别灭菌后再混合，而不采用一起高温灭菌，主要原因是

1. A. 葡萄糖与磷酸盐共热易发生褐变反应生成有害物质
2. B. 两者一起灭菌会使磷酸盐分解失去缓冲能力
3. C. 混合灭菌后培养基pH会明显升高
4. D. 分别灭菌可以提高葡萄糖的灭菌效果

79某操作工在结晶工序中发现晶体颗粒过于细小，母液黏度偏高，下列调整措施中最可能改善晶体粒度的是

1. A. 适当降低降温速率并缓慢搅拌
2. B. 提高搅拌转速使晶体充分碰撞
3. C. 快速降温使溶液迅速达到过饱和
4. D. 减少晶种加入量并延长养晶时间

80在青霉素发酵过程中，补加葡萄糖前体苯乙酸时，最应关注的操作要点是

1. A. 维持苯乙酸浓度在适宜范围避免过高毒害菌体
2. B. 将苯乙酸一次性全部加入罐内简化操作
3. C. 提高苯乙酸浓度以增加前体供应量提高效价
4. D. 将苯乙酸与氨水混合后高温灭菌再补入

81某批硫酸铵盐析沉淀后的蛋白质沉淀物需要脱盐，下列方法中适合实验室小量样品且能保持蛋白质活性的脱盐方式是

1. A. 透析袋对流水透析后再对缓冲液透析
2. B. 加热蒸发浓缩后冷却结晶除盐
3. C. 加入硫酸铵至饱和后离心取沉淀
4. D. 用强酸型阳离子交换柱吸附脱盐

82在生化药品冻干制剂生产中，制品预冻阶段温度应设定在

1. A. 制品共晶点温度以下5至10℃
2. B. 制品共晶点温度以上5至10℃
3. C. 0℃附近使制品部分冻结
4. D. 制品崩解温度以上10℃

83在生化药品生产中使用超滤膜包进行浓缩时，若发现膜通量明显下降且跨膜压差升高，最可能的原因是

1. A. 料液浓度过低导致膜面剪切力不足
2. B. 膜面浓差极化或凝胶层形成
3. C. 操作温度过低使料液黏度增大
4. D. 循环流速过快导致膜面冲刷过度

84某批发酵液在提取前需要预处理以去除菌体和部分杂蛋白，采用板框过滤时，为改善过滤速度常加入助滤剂，下列哪种助滤剂最常用于抗生素发酵液的板框过滤？

1. A. 硅藻土
2. B. 活性炭
3. C. 氯化钠
4. D. 葡萄糖

85某发酵车间在对种子罐进行实消（实罐灭菌）时，操作工先夹套通蒸汽升温至90℃再直接通入罐内蒸汽，此操作的主要目的是？

1. A. 防止罐内物料因温差过大产生对流死角
2. B. 提高夹套蒸汽压力以缩短灭菌时间
3. C. 使培养基中的淀粉提前糊化
4. D. 让耐热芽孢提前萌发便于杀灭

86某批冻干产品在冻干过程中出现瓶内产品表面起泡、部分飞溅到瓶壁，最可能的原因是？

1. A. 预冻阶段降温速率过快
2. B. 升华阶段真空度过高
3. C. 解析干燥阶段升温过快
4. D. 灌装后放置时间过短就进冻干机

87某批次发酵液在提取前需进行固液分离，若目标产物为胞外酶且菌体较易沉降，最适宜采用的分离方式是

1. A. 高速管式离心机连续离心
2. B. 板框压滤机恒压过滤
3. C. 碟片式离心机间歇排渣
4. D. 错流微滤膜组件循环浓缩

88发酵罐实罐灭菌时，若夹套通蒸汽升温至121℃后立即关闭蒸汽并保压，最可能造成的后果是

1. A. 培养基成分被过度破坏
2. B. 罐内冷点未达到灭菌温度
3. C. 罐体因压力骤增而变形
4. D. pH电极因高温而失效

89在结晶工序中，为获得较大且均匀的晶体，通常采取的操作是

1. A. 快速降温并剧烈搅拌
2. B. 缓慢降温并控制过饱和度
3. C. 加入大量晶种后立即降温
4. D. 提高溶液黏度后快速搅拌

90关于发酵罐灭菌后冷却操作，下列做法正确的有（多选）

1. A. 夹套通冷却水快速降温
2. B. 罐内通无菌空气维持正压
3. C. 冷却至接种温度后立即接种
4. D. 冷却过程中关闭排气阀保压
5. E. 冷却水温度低于培养基温度即可

91离子交换法提取氨基酸时，上柱料液流速通常控制在每小时多少倍树脂床体积

1. A. 0.5～1倍
2. B. 2～4倍
3. C. 6～8倍
4. D. 10～12倍

92在生化药品纯化中使用凝胶过滤层析时，目标蛋白在洗脱过程中最先流出的原因是

1. A. 分子量大于凝胶排阻极限
2. B. 分子量小于凝胶排阻极限
3. C. 等电点高于缓冲液pH
4. D. 疏水性弱于凝胶介质

93在酶制剂盐析沉淀工序中，向酶液中缓慢加入硫酸铵并搅拌，其主要作用是

1. A. 降低酶蛋白溶解度使其沉淀
2. B. 提高酶蛋白溶解度便于过滤
3. C. 使酶蛋白变性失活
4. D. 调节酶液pH至等电点

94某厂用离子交换层析纯化一种等电点为5.0的蛋白质，上样缓冲液pH选为5.0，此时该蛋白质带净电荷的特点及与阳离子交换剂的结合情况是

1. A. 带正电，可与阳离子交换剂结合
2. B. 带负电，可与阴离子交换剂结合
3. C. 净电荷为零，与交换剂基本不结合
4. D. 带正电，但只能与阴离子交换剂结合

95在基因工程菌发酵中，诱导剂IPTG加入的时间通常选择在

1. A. 接种后立即加入以缩短表达周期
2. B. 菌体生长进入对数中期且密度适宜时
3. C. 菌体生长进入稳定期后加入
4. D. 发酵结束前加入以提高表达量

96在抗生素发酵中，补料分批培养与分批培养相比，其主要优点是

1. A. 缩短发酵周期并减少设备投资
2. B. 避免底物抑制和代谢阻遏以提高产量
3. C. 简化灭菌操作并降低染菌风险
4. D. 减少种子制备步骤并提高接种量

97在蛋白质盐析过程中，硫酸铵加入方式对结果影响较大，正确做法是

1. A. 一次性快速加入固体硫酸铵并剧烈搅拌
2. B. 缓慢加入固体硫酸铵并温和搅拌
3. C. 一次性加入饱和硫酸铵溶液并静置
4. D. 快速加入饱和硫酸铵溶液并加热

98某生化药品发酵结束后需分离菌体与发酵液，若目标产物为胞外分泌型蛋白，应优先选择的操作是

1. A. 离心分离菌体后收集上清液
2. B. 高压均质破碎菌体后离心
3. C. 超声破碎后取沉淀复溶
4. D. 冻融循环后直接过滤除菌

99在蛋白质盐析沉淀操作中，加入硫酸铵时需要在低温下缓慢搅拌并分批加入，其主要目的是

1. A. 防止局部盐浓度过高导致目标蛋白变性
2. B. 使硫酸铵溶解更加充分
3. C. 提高盐析沉淀的收率至最高
4. D. 促进杂蛋白优先沉淀去除

100某生化药品生产车间在纯化水系统消毒后取样检测，发现回水口微生物计数超标而产水口合格，最可能的原因是

1. A. 管道回路存在死角或流速不足形成生物膜
2. B. 产水口取样操作未按无菌要求执行
3. C. 纯化水机反渗透膜组件已破损
4. D. 原水预处理系统加氯量不足