1在枯草芽孢杆菌发酵生产某胞外酶时，发酵液经离心去除菌体后，上清液需进行硫酸铵盐析，盐析操作中通常将硫酸铵缓慢加入并持续搅拌，其主要目的是
- A. 防止局部盐浓度过高导致目标蛋白变性失活
- B. 提高硫酸铵在溶液中的溶解度以缩短盐析时间
- C. 使菌体碎片同步沉淀以简化后续离心步骤
- D. 促进目标蛋白与杂蛋白形成共沉淀以提高收率
2某发酵车间在发酵过程中发现pH持续下降且补碱量明显高于往常，镜检发现菌体形态异常、杂菌较多，此时最合理的处置是
- A. 继续补碱维持pH并延长发酵周期
- B. 停止补料并加大通气量观察
- C. 取样留样后对该罐进行灭菌排放处理
- D. 提高罐温至45℃以抑制杂菌
3某纯化车间用超滤膜浓缩蛋白，运行中发现通量骤降且跨膜压差升高，最可能的处理是
- A. 提高操作压力继续浓缩
- B. 停机进行反冲洗或化学清洗
- C. 降低料液温度至4℃继续运行
- D. 更换为截留分子量更小的膜
4某操作工在结晶工序中用降温方式使生化药品从溶液中析出，发现晶体细小且含杂质较多，若要改善晶体质量，比较合理的调整方向是
- A. 适当减慢降温速率并控制过饱和度
- B. 加快降温速率以缩短结晶时间
- C. 提高搅拌转速使晶体充分破碎
- D. 减少晶种加入量或不加晶种
5冻干机在升华干燥阶段，产品温度接近或超过共晶点温度，可能造成的直接后果是
- A. 产品含水量偏高
- B. 产品发生塌陷或萎缩
- C. 冻干周期缩短且质量提升
- D. 瓶内真空度下降
6在青霉素发酵生产中，发酵液经板框过滤后所得滤液需进行萃取，此时将滤液pH调至2.0~2.5的目的是什么
- A. 使青霉素由游离酸形式转入有机相
- B. 使杂蛋白变性沉淀便于离心去除
- C. 促进青霉素与苯乙酰胺侧链结合
- D. 降低滤液黏度以提高过滤通量
7发酵罐实消结束后，操作工准备接无菌空气降温，此时罐内维持正压的最主要目的是什么
- A. 防止罐内培养基因缺氧而染菌
- B. 防止外界带菌空气倒吸入罐内
- C. 防止罐内蒸汽冷凝水回流过多
- D. 防止罐压过高导致安全阀起跳
8发酵罐实罐灭菌时，夹套通蒸汽预热阶段通常应将罐内压力控制在哪个范围以避免物料局部过热？
- A. 0.05～0.10 MPa
- B. 0.15～0.20 MPa
- C. 0.25～0.30 MPa
- D. 0.35～0.40 MPa
9某发酵车间拟对种子罐进行空罐灭菌，操作顺序中正确的一项是？
- A. 先通入蒸汽升压再打开排气阀
- B. 先打开排气阀再通入蒸汽升温
- C. 关闭所有阀门后通蒸汽保压
- D. 先夹套升温至100℃再通直接蒸汽
10发酵过程中溶氧电极读数突然降至接近零，而罐压和通气量正常，最先应检查
- A. 电极膜是否破损或电解液耗尽
- B. 菌体是否进入衰亡期
- C. 培养基是否被污染
- D. 搅拌电机是否反转
11某批链霉素发酵液放罐后需先过滤去除菌丝体，下列操作中符合过滤工序要求的是
- A. 趁热过滤以降低黏度
- B. 冷却至4℃后过滤
- C. 加入甲醛固定后过滤
- D. 调pH至2.0后过滤
12在抗生素发酵中，菌体进入次级代谢产物合成期后，通常采取的控制策略是
- A. 维持菌体高速生长并大量补氮
- B. 限制氮源并适度控制比生长速率
- C. 降低温度至菌体停止代谢
- D. 持续提高pH以促进菌体自溶
13在抗生素发酵生产中，发酵液经离心除去菌体后得到的滤液，下一步最常采用的提取方法是
- A. 溶剂萃取法
- B. 离子交换法
- C. 盐析沉淀法
- D. 凝胶过滤法
14某批链霉素发酵液放罐后进行板框过滤，滤液澄清度不合格，操作记录显示过滤压力始终维持在0.6 MPa，该压力高于工艺规程要求的0.3～0.4 MPa，压力偏高最可能造成的直接后果是
- A. 菌丝体被压碎使滤液浊度升高
- B. 滤布孔隙被细颗粒迅速堵塞
- C. 板框密封垫因高压发生渗漏
- D. 滤液温度升高导致效价下降
15某生化药品精制工序采用凝胶过滤层析，上样体积为柱床体积的8%，洗脱时发现各组分峰形明显变宽且分离度下降，操作记录显示洗脱流速为1.5 mL/min（规程要求0.5～0.8 mL/min），造成峰形变宽的主要原因是
- A. 流速过快使传质不充分导致峰扩展
- B. 上样体积偏小使样品过于稀释
- C. 凝胶介质粒径过小造成涡流扩散
- D. 洗脱缓冲液离子强度过高
16发酵过程中补料速率过快导致代谢副产物积累，操作工拟调整补料策略，较合理的做法是
- A. 维持补料速率并提高搅拌转速
- B. 将补料方式改为指数流加并按溶氧反馈调节
- C. 暂停补料至副产物被菌体重新利用
- D. 提高发酵温度以加快副产物代谢
17某批注射用生化药品在无菌检查中初检阳性，正确的复检处置是
- A. 取同批样品重新进行无菌检查
- B. 直接判定该批不合格并销毁
- C. 对初检阳性管进行传代培养确认
- D. 重新取样后加大检验量复检
18在生化药品提取工序中，采用有机溶剂萃取目标产物时，下列操作有助于提高萃取收率的是（多选）
- A. 选择与水相和目标产物极性匹配的萃取剂
- B. 通过多次少量萃取代替单次大量萃取
- C. 萃取前将水相pH调节至目标产物分配系数较大的条件
- D. 萃取时将两相温度升高至有机溶剂沸点附近
- E. 萃取后静置时间尽量缩短以加快分液速度
19在青霉素发酵生产中，发酵液经板框过滤除去菌丝体后，滤液下一步通常采用何种方法进行初步浓缩和纯化
- A. 溶剂萃取法
- B. 离子交换法
- C. 凝胶过滤法
- D. 冷冻干燥法
20某批发酵液在提取工序采用离子交换法吸附目标产物后，先用纯水正洗，再用含盐缓冲液洗脱，纯水正洗的主要作用是
- A. 洗去树脂间残留的发酵液和杂蛋白
- B. 把目标产物提前解吸下来
- C. 使树脂充分溶胀防止破碎
- D. 调节洗脱液的离子强度
21在抗生素发酵中，发酵液经板框过滤后滤液仍浑浊，显微镜下可见大量未被截留的菌丝碎片，最可能的原因是
- A. 过滤时进料压力上升过快导致滤布击穿
- B. 滤液收集罐温度偏低使蛋白析出
- C. 发酵液pH在过滤前被调至等电点
- D. 助滤剂使用量比工艺规定偏多
22在离子交换法纯化某碱性多肽时，操作工用pH 6.0的缓冲液上样，目标多肽带正电荷，应选用哪种离子交换介质
- A. 弱酸性阳离子交换树脂
- B. 强碱性阴离子交换树脂
- C. 弱碱性阴离子交换树脂
- D. 强酸性阳离子交换树脂
23离子交换层析分离某碱性蛋白时，若目标蛋白等电点为9.0，上样缓冲液pH选择下列哪个值最有利于其结合阳离子交换剂
- A. pH 4.5
- B. pH 7.0
- C. pH 9.0
- D. pH 10.5
24在生化药物纯化中使用凝胶过滤层析时，操作工将样品上样体积控制在外水体积的1%~5%，这样操作的主要依据是
- A. 上样体积过大导致峰形变宽分辨率下降
- B. 上样体积过小会使凝胶柱超载
- C. 上样体积影响凝胶颗粒的孔径分布
- D. 上样体积决定洗脱液的离子强度
25某批硫酸铵盐析沉淀后的蛋白质沉淀物需要脱盐，下列方法中适合实验室小量样品且能保持蛋白质活性的脱盐方式是
- A. 透析袋对流水透析后再对缓冲液透析
- B. 加热蒸发浓缩后冷却结晶除盐
- C. 加入硫酸铵至饱和后离心取沉淀
- D. 用强酸型阳离子交换柱吸附脱盐
26在生化药品的离子交换层析纯化中，目标蛋白等电点为5.5，洗脱时若采用pH梯度洗脱，通常使pH如何变化更有利于目标蛋白从阳离子交换柱上洗脱？
- A. 由低pH向高pH升高
- B. 由高pH向低pH降低
- C. 恒定在pH 3.0不变
- D. 恒定在pH 10.0不变
27冻干过程中制品出现塌陷或萎缩，最可能的原因是
- A. 预冻速率过快
- B. 升华阶段搁板温度过高
- C. 解析干燥真空度偏低
- D. 西林瓶装量偏大
28离子交换法提取氨基酸时，上柱料液流速通常控制在每小时多少倍树脂床体积
- A. 0.5～1倍
- B. 2～4倍
- C. 6～8倍
- D. 10～12倍
29冻干过程中一次干燥（升华干燥）阶段搁板温度应控制在
- A. 低于制品共晶点温度以下
- B. 高于制品共晶点温度但低于崩解温度
- C. 等于制品共晶点温度并保持恒定
- D. 高于制品崩解温度以加速升华
30在基因工程菌高密度发酵中，采用补料分批培养的主要目的是
- A. 避免底物抑制和代谢副产物积累
- B. 缩短发酵周期至最短时间
- C. 减少发酵罐灭菌操作步骤
- D. 使菌体在延滞期快速积累产物
